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炮制与超微粉碎对水蛭药效影响的初步实验研究

吕文海1，邱福军2，王作明3

（1、山东中医药大学，山东 济南 350014；2.中国药材公司，北京 100062；3、山东省委医院，山东 济南250001）

[摘要] 目的：比较水蛭煎剂、普通散剂的药效以及新法炮制与超微粉碎对其药效的影响。方法：用BT-1500型离心沉降式粒度分布仪测定了生、制水蛭超微散的粒度。通过小鼠抗凝血、抗血栓作用，比较了水蛭丝水煎剂1/2煎剂剂量的普通散、超微散、制水蛭超微散的药效。并对其安全性进行了考察。结果：供试品药效由强到弱为制水蛭超微散、生水蛭超微散、生水蛭散、生水蛭水煎剂、对照组。结论：水蛭经超微粉碎，尤其是新法炮制后超微粉碎，可明显改善气味、口感，提高药效。

[关键词] 水蛭；新法炮制；超微粉碎；增效

[中图分类号]  R283.1   [文献标识码]B[文章编号] 1001-5302（2001）04-0241-04

水蛭作为经典的破血逐瘀药，近代在中医临床与中成药生产中得到了愈来愈广泛的应用，并成为了一种世界性药物。经前期工作，初步证明水蛭的主流药用品种为蚂蟥（宽体金线蛭Whit mania pigra Whit man）；切丝入药优于《药典》规定的切段入药；生用在活血化瘀等药效方面，优于传统烫制品；按新法制成的制水蛭能在改善原药气味的同时，较好的保存其内在成分，且溶出效果及抗凝血、抗血栓、降低血小板聚集率、改善微循环、降胆固醇等药效学指标，均优于传统烫制水蛭，部分指标也优于生水蛭，有保质增效的趋势[1]。但水蛭在临床应用中入汤剂味劣难服，易反胃败胃。临床中亦有研末或装胶囊吞服效优的经验。

近几年由于超微粉碎技术的发展，可达到使动、植物细胞90%以上破壁的细度。由于粒度的减小，也有利于改善药物的气味及服用口感。鉴于水蛭经炮制和超微粉碎后有无药效与应用方面的优势，未见报道，笔者对此作了初步的实验研究。

1实验材料

1.1供试材料

水蛭购自山东省立医院，经李定格、李峰老师鉴定为蚂蟥（宽体金线蛭Whit mania pigra Whitman）。

1.2供试品制备

水蛭丝：原药材挑去杂质，擦净，盖湿纱布略润后切2~3mm细丝。在切制过程中发现，部分药材中间填充有白色结晶性粉末，口尝无咸、涩味、初步印象为石膏，切丝晾干后过筛可大部脱落。经紫外灯照射45min后密闭备用。

生水蛭水煎液：净水蛭丝2.6g，加10倍量水浸泡30min，微沸30min，过滤，药渣加8倍量水，微沸30min，过滤，合并滤液，定容100ml，浓度为26˙ml-1。

生水蛭普通散：净水蛭丝经粉碎研磨过100目筛。

生水蛭超微散：净水蛭丝经SQW-6型三清微粉机粉碎。出料温度35~40℃。

制水蛭超微散：净水蛭丝酒润麸制炮制后，SQW-6型三清微粉机粉碎。出料温度同上。

3种散剂均平铺一薄层，经紫外灯照射45min后，密切保存备用。

1.3  实验动物与仪器

昆明种小鼠（山东中医药大学动物房提供）：SQW-6型三清Jackpot超微粉碎机；BT-1500型离心沉降式粒度分布仪。

2 实验方法与结果

1.1水蛭超微散粒度的测定

按《药典》规定，水蛭普通散的粒度为（150±6）µm。生、制水蛭超微散的粒度经BT-1500型离心沉降式粒度分布仪测定，结果见表1、表面化。实验表明，生、制水蛭经微粉机粉碎，可使其中位径分别达到10.24µm和7.79µm；最大粒径分别为72µm和24.81µm；50%的粒度在10µm和8µm以下，90%的粒度在50µm和23µm以下，确能达到超微的效果，而且经新法炮制后更利于粉碎，其粒度明显小于生水蛭。

表1生水蛭超微粉粒度分布测试结果

粒径        区间频率       累积频率

/µm           /%               /%

0.00~1.00       3.33            3.30

1.00~2.00       4.70            8.80

2.00~3.00       4.93            12.93

3.00~4.00       5.38            18.32

4.00~5.00       5.27            23.59

5.00~6.00       4.71            28.30

6.00~7.00       5.40            33.70

7.00~8.00       5.79            39.49

8.00~9.00       5.50            44.99

9.00~10.00       4.23            49.22

10.00~11.00       3.86            53.08

11.00~12.00       0.72            53.80

12.00~13.00       0.00           53.80

13.00~14.00       0.78            54.58

14.00~15.00       3.15            57.73

15.00~20.00       10.59            68.31

20.00~30.00       20.19            88.50

30.00~40.00       1.13            89.63

40.00~50.00       1.02            90.65

50.00~60.00       6.19            96.84

60.00~70.00       3.05            99.89

70.00~72.00       0.11            100.00

72.00~73.00       0.00            100.00

73.00~74.00       0.00            100.00

注：中位径10.24µm   最大粒径72µm

2.2   供试品对小鼠凝血时间的影响取体重（28±3）g的成年雄性小鼠，随机分为5组。水蛭煎剂组以0.4mg˙g-1剂量灌胃。3种散剂组每天灌胃临时配成13mg˙ml-1的混悬液，以0.2mg˙g-1的剂量灌胃（煎剂的1/2量）。用生理盐水作对照。每天3次，连续给药3d ,第4天给药1h后，从小鼠眼内毗球后静脉丛取血，按毛细管法[2]，测定各组小鼠的凝血时间，经t检验统计分析，结果见表3。实验表明，水蛭煎剂与水蛭散剂均有确切的抗凝活性。1/2剂量的散剂，其抗凝效果优于汤剂。超微散的抗凝活性有优于普通散的趋势，制水蛭超微散又明显优于生水蛭超微散。提示水蛭用新法炮制和超微粉碎后有利于增强其抗凝活性。

表2  制水蛭超策粉粒度分布测试结果

粒径        区间频率       累积频率

/µm           /%               /%

0.00~1.00       2.59            2.59

1.00~2.00       4.19            6.77

2.00~3.00       6.51           13.28

3.00~4.00       5.22            18.50

4.00~5.00       12.06            30.56

5.00~6.00       6.20            36.75

6.00~7.00       7.03            43.79

7.00~8.00       6.26            50.05

8.00~9.00       6.85            56.89

9.00~10.00       2.84            59.73

10.00~11.00       3.51            63.24

11.00~12.00       0.64            63.88

12.00~13.00       0.00           63.88

13.00~14.00       0.72            64.60

14.00~15.00       2.77            67.37

15.00~20.00       4.09            71.46

20.00~30.00       4.75            76.21

30.00~40.00       1.99            78.20

40.00~50.00       3.38            81.58

50.00~60.00       2.16            83.74

60.00~70.00       1.92            85.66

70.00~72.00       4.61            90.27

72.00~73.00       6.17            96.43

73.00~74.00       3.57            100.00

注：中位径7.97µm   最大粒径24.81µm

表3  供销试品对小鼠凝血时间的影响

组别             n         剂量       凝血时间         p

                         /mg˙g-1        /min

生理盐水         10        0.4        2.96±1.43

生水蛭水煎剂     13        0.4        4.95±2.32       ＜0.05（）

生水蛭普通剂     14        0.2        6.23±2.73       ＞0.05（）

生水蛭超微散     13        0.2        6.33±2.60       ＞0.05（）

制水蛭超微散     13        0.2        9.38±2.19       ＜0.01（）

注：（）示该组与上一组比较

2.3  供试品对小鼠出血时间的影响

取体重（28±3）g的成年雄性小鼠，随机分为5组。以上法相同剂量给小鼠灌胃3d，每天2次，第4天给药1h，用剪尾法[2]测定各组小鼠剪尾5mm的出血时间，结果见表4。实验表明，生水蛭水煎液与对照组相比，虽有作用增强的趋势但无显著性差异，而普通散剂组呈显著性差异，两种超微散均为极显著性差异，制超微散更优。

表4  供试品对小鼠出血时间的影响

组别             n         剂量       凝血时间         p

                         /mg˙g-1        /min

生理盐水         10        0.4        7.95±2.58

生水蛭水煎剂     10        0.4        10.28±3.19       ＞0.05（）

生水蛭普通散     12        0.2        14.32±7.08       ＜0.05（）

生水蛭超微散     12        0.2        15.42±5.09       ＜0.01（）

制水蛭超微散     10        0.2        16.45±4.55       ＜0.01（）

注：（）示与NS组比较

2.4 供试品对小鼠体内抗栓作用的影响

抗栓实验方法学研究认为，在（37±1）℃的生理盐水中，测定小鼠尾出血时间，与鼠颈动脉旁路血栓形成法具有很好的平行性。可作为一种简便易行的抗血栓形成药物的体内初筛法用于实验[3]。取体重（20±2）g的雄性小鼠随机分为5组，以给定剂量灌胃3d，第4天给药1h后，将小鼠固定，距尾尖3mm处剪断，垂直放放（37±1）℃生理盐水中，使尾端在液面下3cm，记录出血时间，结果见表5。实验表明，体内抗栓作用，也以超微散为优，但生、制品之间的差异不明显。

表5供试品对小鼠体内抗栓作用比较

组别             n         剂量       凝血时间         p

                         /mg˙g-1        /min

生理盐水         10        0.3ml        0.95±0.22

生水蛭水煎剂     10        0.390        1.09±0.25       ＞0.05（）

生水蛭普通散     12        0.195        1.24±0.59       ＞0.05（）

生水蛭超微散     10        0.195        1.66±0.76       ＜0.05（）

制水蛭超微散     10        0.195        1.69±0.53       ＜0.01（）

注：（）示与NS组比较

2.4对小鼠安全性的考察

水蛭经炮制和超微粉碎后药效有所增强，其毒性是否增大？为此考察了供试品对小鼠的安全性。取体重（20±2）g的健康小鼠80只，随机分为4组，1组给予1300/mg˙ml-1的水煎液，0.4ml/只，3次/d，1.56g˙d-1（相当于《药典》规定的成人每日汤剂服用量的200倍）。其余3组分别给予130/mg˙ml-1的生水蛭普通通散、超微散和制水蛭超微散0.3ml/只，3次/d，117mg˙d-1（此为能通过灌胃器的散剂最大剂量，相当于《药典》规定成人每日服粉末量的30倍），给药后观察1周，结果小鼠活动、粪便、毛色正常，无死亡。每组平均体重增加6~8g，说明水蛭经新法炮制和超微粉碎后用药是安全的。该结果与前期工作和水蛭的亚急性毒性报道[4]相一致，支持临床中认为“水蛭系疗效卓著的无毒品”的观点。

3 小结与讨论

3.1水蛭丝入药，既有利于其药物成分的煎 出，又有利于祛除水蛭体内人为掺入杂质，优于《药典》规定的切段入药。

3.2 生水蛭经超微粉碎，90%的粒度为普通散的1/4，50%的粒度为普通散的1/15，且颜色变浅，腥味降低，质地细腻，利于吞服。1/2煎剂剂量的抗凝血、抗血栓作用优于水蛭丝煎剂，肯定更优于《中国药典》2000年版规定的水蛭段煎剂，证明多数临床经验认为水蛭服散效优是正确的，利用超微技术将更有利于水蛭药效的发挥。

1.3水蛭经新法炮制后，有利于矫正其气味，超微粉碎后其粒度也小于生水蛭，最大粒径为生水蛭超微粉1/3，仅为24µm。实验药效指标在3种散剂中呈最优趋势，值得进一步深入研究及推广应用。

1.4虽然药物粒度的减小，有利于其溶解吸收并改善气味口感，但也会引起表面能和稳定性等方面的变化。制水蛭超微粉的稳定性及最佳粒度范围等问题，还有待于进一步研究。

1.5水蛭作为一种世界性药物，研究最多的品种是日本医蛭（Hirude nipponica  Whitman），而我国临床用药的主流商品是宽体金线蛭。该品种有效部位及有效成分的研究，目前几近空白。深入研究其成分，将有利于饮片质量的控制和炮制原理的研究，此类探索目前正在进行之中。

[参考文献]

[1]吕文每，王琦，武继彪，等.水蛭饮片炮制研究.中药材，1996.19（4）：294

[2]李仪奎.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社，1991.494.

[3]顾云，孟娟如.介绍一种简易的抗血栓药物体内筛选法.中国药理学通报，1991，7（4）：317

[4]陈小野，邹世洁.水蛭的医学研究概述.成都中医学院学报.1987，10 (5)：51.